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TMB(3',3',5',5',-四甲基联苯胺)是辣根过氧化物酶(HRP)的显色底物，是目前HRP系统ELISA实验的常用显色试剂。TMB显色底物工作液在HRP的催化下，形成蓝色的阳离子产物，在370nm和652nm处有主要吸收峰。加酸终止反应后，蓝色转变为黄色，可以在450nm波长下测定。本试剂盒使用方便，灵敏度高，效果稳定，颜色产物为可溶性，适用于ELISA，不推荐用于IHC实验。

• 显色工作液应即用即配，放置超过10分钟会影响显色效果。
  
• TMB颜色底物显色后，随着时间的延长，颜色会逐渐消退，因此显色并终止反应后应尽快读值，否则会影响检测的准确性。
  
• 以96孔酶标板每孔用量100μL显色工作液计算，5mL 20×TMB Kit可完成1000孔样品的检测。
  
• 本制品仅限于科研，不能用于人体实验或人体治疗。

• TMB显色工作液配制：
  根据实验需用量，将20×TMB-A和1×TMB-B以1：19的比例均匀混合，即配制成为TMB显色工作液。
  
• 显色：
  
  • 经HRP标记物孵育并充分洗涤后，酶标板每孔中加100μL TMB显色工作液。
    
  • 室温避光孵育25～30分钟，反应产物呈蓝色。
    
  • 每孔加50μL 0.5M H2SO4终止显色，此时蓝色产物变为亮黄色。
    
  • 将酶标板置于酶标仪中，450nm波长下读取数据。